DNA的半保存仿制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的效果下能够变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参加下,依据碱基互补配对原则仿制成同样的两分子拷贝。PCR技能的根本原理类似于DNA的天然仿制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个根本反响过程构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时刻后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反响作预备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的效果下,以dNTP为反响原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保存仿制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保存仿制链。
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